实验七 二乙酰一肟法测定血清尿素

【原理】

二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的 4 ， 5- 二甲基 -2- 氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一 肟与强酸作用产生二乙酰。

【试剂】

1 ．酸性试剂 在三角烧瓶中加去离子水约 100ml ，然后加入浓硫酸 44ml 、 85% 磷酸 66ml 。冷至室温，加入氨基硫脲 50mg 及硫酸镉 (CdSO 4 · 8H 2 O)2g ，溶解后用去离子水稀释至 1L 。置棕色瓶中， 4 ℃可保存半年。

2 ． 179.9mmol/L 二乙酰一肟溶液 称二乙酰一肟 20g 溶于去离子水中并定容至 1L 。置棕色瓶中， 4 ℃可保存半年。

3 ． 尿素标准贮存液 (100mmol/L) 精确称取于 60 ～ 65 ℃干燥恒重的尿素 (Mw 为 60.06)0.6g ，溶解于无氨去离子水，并 定容 至 100ml ，加 0.1g 叠氮钠防腐， 4 ℃可保存 6 个月。

4 ．尿素标准应用液 (5mmol/L) 取 5ml 上述贮存液用无氨去离子水稀释至 100ml 。

【操作步骤】 按下表操作。

二乙酰一肟法操作步骤

加入物 (ml)	空白管	标准管	测定管
血清	－	－	0.02
尿素标准应用液	－	0.02	－
去离子水	0.02	－	－
二乙酰一肟溶液	0.5	0.5	0.5
酸性试剂	5.0	5.0	5.0

混匀，置沸水浴加热 12min ，取出置冷水中冷却 5min ，以空白管调零，在 540nm 处读取各管吸光度。

【计算】

【参考范围】 血清尿素 1.78 ～ 7.14mmol/L 。

【临床意义】

1 ．血液尿素浓度增高 分生理性和病理性因素两方面。

(1) 生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高 0.3 ～ 0.5mmol/L ，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为 0.63mmol/L 。

(2) 病理因素

1) 肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。

2) 肾性：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。

3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。

2 ．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外，常见于肝功能衰竭患者。

【注意事项】

1 ．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象， ( 每小时小于 5%) 。煮沸显色经冷却后，应及时比色。

2 ．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作 50 倍以上稀释。

3 ．尿素浓度以前习惯用尿素氮 mg/dl 表示，因为一个尿素分子中有 2 个氮原子，所以 1mmol 尿素相当于 28mg 尿素氮 (1mmol/L 尿素相当于 2.8mg/dL 尿素氮 ) ；另外还有以尿素氮 mmol/L 表示，则 1mmol/L 尿素＝ 2mmol/L 尿素氮。世界卫生组织推荐尿素用 mmol/L 表示，我国卫生部临检中心也已规定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。

【评价】

1 ．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。 在标本数量多时加热开始难以达到 100 ℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。若改善加热条件，如采用在水浴锅底部加置高约 5mm 的网垫，在网垫上加热显色，可使 CV 由不加网垫时的 6.46% 降至 2.99% 。

2 ．线性上限仅达 7.14mmol/L ；回收率为 96% ～ 102.1% 。

3 ．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达 171 μ mol/L 、血红蛋白达 10g/L 均无影响。