实验六 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

【原理】

血清中总胆固醇 (total cholesterol ， TC) 包括游离胆固醇 (free cholesterol ， FC) 和胆固醇酯 (cholesterol ester ， CE) 两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸 (FFA) ，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△ 4- 胆甾烯酮和过氧化氢， H 2 O 2 在 4- 氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中 TC 含量成正比。

【试剂】

1 ．胆固醇液体酶试剂组成 ( 具体含量见相关文献 )

GOOD's 缓冲液 (pH6.7) 50mmol/L

胆固醇酯酶 ≥ 200U/L

胆固醇氧化酶 ≥ 100U/L

过氧化物酶 ≥ 3 000U/L

4-AAP 0.3mmol/L

苯酚 5mmol/L

2 ．胆固醇标准溶液 5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇 200 mg ，用异丙醇配成 100 ml 溶液，分装后， 4 ℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。

【操作步骤】 终点法检测 TC 按下表依次加样。

酶法测定 TC 操作步骤

加入物	空白管	标准管	测定管
血清 ( μ l)	－	－	10
标准液或定值血清 ( μ l)	－	10	－
蒸馏水 ( μ l)	10	－	－
酶试剂 ( μ l)	1 000	1 000	1 000

混匀后， 37 ℃保温 5 min ，用分光光度计比色，于 500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。

【计算】

血清 TC (mmol/L) ＝ ×胆固醇标准液浓度

【参考范围】 血清参考值： 3.0 ～ 5.20 mmol/L ；危险阈值： 5.20 ～ 6.20 mmol/L ；高胆固醇血症：≥ 6.20 mmol/L 。

【临床意义】

1 ． TC 增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症 ( 如家族性高胆固醇血症、家族性 ApoB 缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等 ) 、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。

2 ． TC 降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。

【注意事项】

1 ．试剂中酶的质量影响测定结果。

2 ．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。

3 ．检测标本可为血清或者血浆 ( 以肝素或 EDTAK 2 抗凝 ) 。

【评价】 本方法线性范围为≤ 19.38 mmol/L (750 mg/d1) 。

本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。

在终点法中血红蛋白高于 2g/L 时引起正干扰；胆红素高于 0.1g/L 时有明显负干扰；血中维生素 C 与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高 TG 血症对本法无明显影响。

检测 TC 的血清 ( 浆 ) 标本密闭保存时，在 4 ℃可稳定 1 周，－ 20 ℃可稳定半年以上。